MMLV RNAse H Minus First-Strand cDNA Synthesis Kit
• MMLV RNAse H Minus First-Strand cDNA Synthesis Kit
• incluindo dNTPs, anchored oligo(dT)20 primer e random hexamer primer
• 50 reações x 20µL
• ARMAZENAR A -20oC.
Descrição:
• MMLV RNAse H Minus First-Strand cDNA Synthesis Kit é um sistema completo para síntese da primeira fita de moléculas de DNA complementar (cDNA) a partir de RNA mensageiro (mRNA) ou RNA total. Este sistema foi otimizado para a amplificação de cDNA de até aproximadamente 13 kb.
A enzima Transcriptase Reversa M-MLV RNAse Minus é uma versão modificada da enzima M-MLV apresentando mutações de ponto que reduzem a atividade de RNAse H e aumentam a estabilidade térmica.
• Devido a reduzida atividade de RNAse H, não ocorre a degradação de moléculas de RNA durante a etapa de síntese da primeira fita de cDNA, resultando na síntese de uma grande quantidade de moléculas “full-length” de cDNA.
• Devido a aumentada estabilidade térmica, a enzima Transcriptase Reversa M-MLV RNAse Minus pode ser utilizada na síntese de moléculas de cDNA em elevadas temperaturas (42 a 60oC), proporcionando um maior rendimento de moléculas de cDNA.
• Dependendo da aplicação do cDNA, o usuário poderá escolher entre 2 tipos de primers:
Anchored oligo(dT)20 Primer é uma mistura de 12 primers, cada primer consistindo de uma sequência de 20 bases T seguidos por 2 bases adicionais representadas por VN, aonde V é dA, dC ou dG e N é dA, dC, dG ou dT. A “ancora” VN permite a hibridização dos primers somente na extremidade 3′ da cauda de poli-A de mRNA, promovendo uma síntese mais eficiente de moléculas “full-length” de cDNA.
• É o método de escolha para geração de cDNA para experimentos de análise da expressão gênica por RT-qPCR devido a consistência dos resultados.
• Random Hexamer Primer é uma mistura de primers de sequência randômica consistindo de uma sequência de 6 bases N, aonde N é dA, dC, dG ou dT. Devido a hibridização deste primer em várias sequências ao longo da molécula de RNA, teremos uma representação uniforme de todas as moléculas de RNA.
• São utilizados na geração de cDNA a partir de RNAs que não possuem cauda poli-A.
• Desta forma, a síntese do cDNA pode ser realizada a partir de mRNA poli-A+ ou RNA total.
• Na próxima etapa, a reação de PCR é realizada utilizando primers específicos para os genes de interesse.
• Neste caso, recomendamos o uso dos seguintes produtos: Taq DNA Polimerase, Hot Start Taq DNA Polimerase, SYBR Green qPCR Master Mix, EvaGreen qPCR Master Mix ou PROBE qPCR Master Mix
